Monkeypox Virus CE Kit Deteksi Asam Nukleat Metode PCR Fluoresensi

Kit Deteksi Asam Nukleat Virus Monkeypox (Metode PCR Fluoresensi)

[SPESIFIKASI]

24tes/kit, 48tes/kit, 96tes/kit

[PENGGUNAAN YANG DIMAKSUDKAN]

Kit ini digunakan untuk mencapai deteksi kualitatif DNA virus Monkeypox yang diekstraksi dari sampel darah utuh, serum atau lesi eksudat dari pasien yang diduga terinfeksi dan pasien lain yang memerlukan diagnosis.

[PRINSIP]

Kit ini menggunakan teknologi PCR fluoresen waktu nyata untuk memilih wilayah fragmen asam nukleat virus Monkeypox yang relatif terkonservasi sebagai wilayah target amplifikasi, merancang primer spesifik dan label probe fluoresen yang berbeda, dan menggunakan teknologi RT-PCR untuk mendeteksi apakah sampel mengandung virus Monkeypox DNA.

[KOMPONEN]

Catatan:

Jangan mencampur komponen dari batch yang berbeda untuk deteksi.

Reagen ekstraksi asam nukleat: Merekomendasikan Reagen Ekstraksi Asam Nukleat yang diproduksi oleh Dewei.

Tidak perlu ekstraksi asam nukleat saat menggunakan Kontrol Positif, ekstraksi asam nukleat diperlukan saat menggunakan Kontrol Negatif.

[PENYIMPANAN DAN STABILITAS]

Kit dapat disimpan pada -20±5 selama 12 bulan.

Simpan sementara di 4 selama 7 hari.

Pembekuan dan pencairan berulang tidak boleh lebih dari 7 kali, pembukaan reagen tidak boleh lebih dari 7 kali.

Es kering untuk menjaga transportasi suhu rendah tidak boleh lebih dari 4 hari.

[INSTRUMEN]

Instrumen PCR waktu nyata seperti ABI7500, ABI7300, LightCycler480, Bio-Rad CFX96, SLAN-96S dan QuantStudio.

[SAMPLING DAN PENANGANAN]

• Jenis spesimen yang sesuai: sampel eksudat serum dan lesi.
  2. Pengumpulan: Spesimen harus dikumpulkan ke dalam tabung steril sesuai dengan standar
  spesifikasi teknis.
  Penyimpanan: Spesimen yang dikumpulkan harus digunakan untuk deteksi segera atau dibekukan pada:
  -20°C selama tidak lebih dari satu bulan. Pembekuan dan pencairan berulang harus dihindari.
  3. Transportasi: Spesimen harus diangkut menggunakan kotak busa tertutup dengan es.

[PROTOKOL]

• Perlakuan Sampel dan Ekstraksi Asam Nukleat (Area Perlakuan Sampel)

Direkomendasikan untuk mengambil sampel cairan 200μL, Kontrol Positif dan Kontrol Negatif untuk ekstraksi asam nukleat, sesuai dengan persyaratan dan prosedur kit ekstraksi DNA virus yang sesuai.

• Persiapan Reagen PCR (Area Persiapan Reagen)

Masukkan tabung PCR ke dalam tangki reaksi dan atur nama masing-masing sumur reaksi dalam urutan yang sesuai.

Keluarkan MVP PCR Reagent A dan B dari kit, cairkan pada suhu kamar, kocok dan campur, sentrifus pada 8.000 rpm selama beberapa detik sebelum digunakan.

Ambil N pcs tabung reaksi PCR (N = jumlah sampel yang akan diuji + Kontrol Negatif + Kontrol Positif)

Konfigurasi sistem amplifikasi tunggal MVP adalah sebagai berikut:

Setelah komponen tercampur rata, sentrifugasi sebentar agar semua cairan pada dinding tabung disentrifugasi ke dasar tabung, kemudian dispensikan 20 l sistem amplifikasi ke dalam tabung PCR.

• Pengambilan Sampel (Area Persiapan Sampel)

Tambahkan 5µl masing-masing Kontrol Negatif yang diproses, asam nukleat sampel yang akan diuji, dan Kontrol positif MVP ke tabung PCR di atas, kencangkan tutup tabung dan sentrifus pada 8.000 rpm selama beberapa detik, kemudian transfer ke deteksi amplifikasi daerah.

• Amplifikasi PCR (Area Amplifikasi)

Masukkan tabung PCR ke dalam tangki reaksi dan atur nama masing-masing sumur reaksi dalam urutan yang sesuai.

Pengaturan fluoresensi deteksi: (1) virus Monkeypox (FAM);(2) Pengendalian Internal (CY5).

Jalankan protokol bersepeda berikut: ABI7500, Bio-Rad CFX96, SLAN-96S dan QuantStudio, silakan merujuk ke manual pengguna instrumen untuk pengoperasian yang lebih baik:

• Analisis hasil (silakan merujuk ke Manual Pengguna Instrumen)

Setelah reaksi, hasilnya akan disimpan secara otomatis.Klik “Analyze” untuk menganalisis, dan instrumen akan secara otomatis menginterpretasikan nilai Ct dari setiap sampel di kolom hasil.Hasil kontrol negatif dan positif harus sesuai dengan yang berikut:

"5. Kontrol Kualitas".

• Kontrol kualitas

Kontrol Negatif: Tidak ada Ct atau Ct>40 di saluran FAM, Ct≤40 di saluran CY5 dengan kurva amplifikasi normal.

Kontrol Positif: Ct≤35 di saluran FAM dengan kurva amplifikasi normal, Ct≤40 di saluran CY5 dengan kurva amplifikasi normal.

Hasilnya valid jika semua kriteria di atas terpenuhi.Jika tidak, hasilnya tidak valid.

[INTERPRETASI HASIL]

Hasil berikut mungkin terjadi:

CATATAN: Jika terjadi hasil yang tidak valid, sampel perlu dikumpulkan dan diuji kembali.

[BATASAN DETEKSI]

Hasil deteksi kit ini hanya untuk referensi klinis, dan tidak boleh langsung digunakan sebagai bukti diagnosis dan pengobatan klinis.Manajemen klinis pasien harus dipertimbangkan dalam kombinasi dengan gejala, riwayat medis dan riwayat paparan.

Hasil deteksi dapat dipengaruhi oleh operasi, termasuk pengumpulan, penyimpanan, dan transportasi spesimen.Hasil negatif palsu dapat terjadi jika ada kesalahan dalam operasi.Kontaminasi silang selama perawatan spesimen dapat menyebabkan hasil positif palsu.

[SPESIFIKASI KINERJA]

Batasan deteksi: 500 eksemplar / mL.

Presisi: Koefisien variasi (CV, %) nilai Ct presisi dalam-batch/antar-batch adalah 5%.

Akurasi: Tingkat kesesuaian referensi negatif/positif: 100%.

Spesifisitas: tidak ada reaktivitas silang dengan genom manusia dan patogen berikut: virus cacar, virus cacar domba, virus vaccinia, virus cacar air, virus hepatitis B, virus hepatitis C, virus human immunodeficiency, enterovirus.

[PERHATIAN]

• Produk ini hanya digunakan untuk uji in vitro.Silakan baca manual ini dengan seksama sebelum digunakan.
• Gunakan tabung dan ujung steril, bebas DNase dan bebas RNase selama pendeteksian.
• Selama deteksi, perlu untuk menghindari kontaminasi silang, memakai peralatan pelindung yang sesuai, sarung tangan dan masker sekali pakai, dan menyelesaikan operasi di kabinet biosafety untuk menghindari zat berbahaya memasuki saluran pernapasan.
• Jika terjadi kontak dengan kulit dan selaput lendir saat digunakan, harap segera bilas dengan air mengalir, yang tidak akan membahayakan operator.

Semua reagen cair harus dicairkan sepenuhnya dan dicampur pada suhu kamar sebelum digunakan, dan disentrifugasi pada 8.000 rpm selama beberapa detik sebelum digunakan.

Setelah digunakan, kemasan dan cairan limbah harus diperlakukan secara seragam sebagai limbah medis untuk mencegah pencemaran.